Sütte Fosfataz Deneyi Nasıl Yapılır?

Sütte Fosfataz Deneyi

Yöntemin Prensibi
 
Yöntem, sütün iyi bir şekilde pastörize edilip edilmediğini veya pastörüze süte çiğ süt katılıp katılmadığının kontrolu amaçlıdır. Aynı numuneden alınan farklı örneklere, farklı sıcaklıkta lactognost tabletleri veya buffer eriyiği katılarak belirli sıcaklıklarda inkübasyon sağlandıktan sonra meydana gelecek renk değişimi incelenir.

 
I. Yöntem
 
Kullanılan Malzemeler ve Cihazlar 

• Deney tüpü
• Terazi
• Pipet  (1 mL, 5 mL)

Kullanılan Kimyasallar 

Buffer Eriyiği: 3.5 g saf Na2CO3  ile 1.5 g NaHCO3 bir miktar saf su içerisinde çözülerek son hacim 1 L’ye tamamlanır.

Buffer substrat eriyiği: 0.15 g disodyum p-nitrofenilfosfat tarılarak son hacim 100 mL olacak şekilde buffer eriyiği içerisinde çözdürülür.

Deneyin Yapılışı
 
Bir tüpün içerisine 5 mL buffer substrat çözeltisi koyulur. Üzerine 1 mL süt örneği ilave edilerek karıştırılır. 37-38ºC’lik su banyosuna yerleştirilir. 2 saat boyunca karıştırılarak bekletirlir. Bu süre sonunda fosfataz enzimi varsa sarı renkli olan p-nitrofenol serbest hale geçerek açığa çıkar.
 

Yöntem II
 
Kullanılan Malzemeler ve Cihazlar 

• Deney tüpü
• Kullanılan Kimyasallar 
• Lactognost tablet

Deneyin Yapılışı
 
İki farklı tüpe( A ve B tüpleri) 1’er mL’lik süt örneğinden koyulur. B tüpü 80ºC’ye kadar ısıtılır. A tüpüne 1 adet, B tüpüne ise 2 adet lactognost tableti koyularak karıştırılır. 37 ºC’de 1 saat inkübe edilir. A ve B tüplerine 3‘ er tane daha lactognost tableti ilave edilir ve karıştırılır.
 
Eğer  sütte fosfataz enzimi varsa A tüpü 2-3 dakika içerisinde koyu mavi renge dönüşecektir. B tüpü ise sürekli gri renkli kalmalıdır.
 
Fosfataz enziminin bulunması demek sütün yeterince pastörize edilmediğini veya pastörize süte çiğ süt katıldığını gösterir.