Sorhocam.com 2014 yılında Ziraat Mühendisi Arafa KARAÇELEBİ tarafından kurulmuş olup herkesin faydalanabilmesi için ücretsiz olarak hizmet vermektedir.
Bradford Metodu Ile Protein Tayini Analizi Nasıl Yapılır?
Bradford Metodu ile Protein Tayini
Yöntemin Prensibi
Yöntem, Coomassie Brilliant Blue G-250 boyasının proteinlere bağlanması sonucunda oluşturduğu renkli çözeltilerin 595 nm’de absorbansının ölçülmesi ilkesine dayanır.
Kullanılan Malzemeler ve Cihazlar
- Spektrofotometre
- Spektrofotometre küveti
- Terazi
- Filtre kağıdı (siyah noktalı)
- Huni
- Falcon tüpü (15 mL)
- Mikropipet (100-1000 µl)
- Pipet ucu (mavi)
- Balonjoje (100 mL, 1000 mL)
Kullanılan Kimyasallar
BSA (bovine serum albumin): Stok çözeltiden derişimi 0, 20, 40, 60, 80, 100 mg/L olan standart çözeltiler hazırlanır.
Bradford Reaktifi: 0.1 g Coomassie Brilliant Blue G-250
50 mL %95’lik etil alkol
100 mL %85 Fosforik asit
Yukarıdaki kimyasallar karıştırılarak son hacim saf su ile 1000 mL’ye tamamlanır. Karanlıkta 1 gece karıştırılarak bekletilir. Filtre kağıdından süzülür.
Deneyin Yapılışı
Deney tüpüne analizi yapılacak örnekten 100 µL örnek konulur. Üzerine hazırlanan Bradford çözeltisinden 5 mL eklenerek 5 dakika beklenir. Bu sürenin sonunda 595 nm’de absorbans değerleri okunur.
Standart eğrisi oluşturmak için tüplere örnek yerine konsantrasyonları belli olan standart çözeltiden (BSA) 1’er mL eklenerek yukarıdaki prosedür aynen uygulanır. 595 nm’de absorbans okutularak konsantrasyona karşı absorbans grafiği çizilir. Şahit çözelti için ise yine örnek yerine 1 mL saf su koyularak örnek için uygulanan prosedürün aynısı uygulanır.
Sorhocam.com 2014 yılında Ziraat Mühendisi Arafa KARAÇELEBİ tarafından kurulmuş olup herkesin faydalanabilmesi için ücretsiz olarak hizmet vermektedir.
Bitki hastalıkları, bitki zararlıları, yabancı otlar, şifalı bitkiler, arıcılık, bayilik sınavı notları, bayilik sınavı soruları, online testler, kimyasal analiz yöntemleri, bitki besleme ve gübreleme, tarımsal destekler, peysaj ve süs bitkileri, kimyasal analiz yöntemleri, hijyen eğitimi, pest kontrol yöntemleri