Et Ve Et Ürünlerinde, Meyve Ve Sebze Mamüllerinde Nitrit Tayini Analizi Nasıl Yapılır?

Et ve Et Ürünlerinde, Meyve ve Sebze Mamüllerinde Nitrit Tayini

Yöntemin Prensibi
 
Yöntem, üründeki proteinlerin çöktürülmesi ve süzme işlemi sonucunda nitrit iyonlarının süzüntüye geçmesidir. Bu süzüntüye uygulanan çeşitli işlemler sonucunda oluşan çözeltinin spektrofotometrede absorbansı okunarak nitrit miktarı saptanır.

 
Kullanılan Malzemeler ve Cihazlar

• Spektrofotometre
• Spektrofotometre küveti
• Terazi
• Beher ( 400 mL)
• Balon ( 100, 200 mL, 500 mL)
• Balonjoje (100 mL, 200 mL, 500 mL, 1000 mL)
• Filtre kağıdı (siyah noktalı)
• Huni
• Pipet ( 1ml, 25 mL)

Kullanılan Kimyasallar

1. 6 N 'lik Hidroklorik asit

 
Sülfanilamid çözeltisi: 0,4 g sülfanilamid (NH2C6H4SO2NH2)  saf suda çözülüp, toplam hacim 100 mL'ye tamamlanır.
 
Coupler reaktifi: 0,2 g   N-(l-naftil)etilendiamindihidroklorür (C10H7NHCH2CH2NH2.2HCl)  saf suda çözülüp, toplam hacim 100 mL olacak şekilde saf suyla tamamlanır.
 
Sodyum karbonat çözeltisi: 6 g sodyum karbonat saf suda çözülüp, 100 mL'ye tamamlanır.
 
Demir (III) klorür (0,5 mol): 13 g FeCl3.6H2O  saf suda çözülüp, 100 mL'ye tamamlanır.
 
Standart nitrit çözeltisi: 1.5 g sodyum nitrittoplam hacim 1000 mL olacak şekilde saf su içinde çözülür.  1mL'sinde  1mg NO2 içerir ( Çözelti A)
 

Çözelti A’dan 50 mL alınarak 500 mL'ye saf suyla tamamlanır. 1mL'sinde 0,1 mg NO2 içerir (Çözelti B)
 
Çözelti B’den  5 mL alınıp 500 mL'ye saf su ile tamamlanır. 1 mL'sinde 1 mikrogram NO2 içerir (Çözelti C) 

 
Deneyin Yapılışı
 
10 g örnek beher içinde sıcak saf su ile iyice karıştırılır. 500 mL'lik balona alınıp, beher sıcak saf su ile yıkanır. Yaklaşık balon içeriği 300 mL düzeyinde olmalıdır. Balon ve içindekiler sıcak su banyosunda yarım saatte bir çalkalanarak iki saat kaynatılır. Bu zaman sonunda balon soğutulur ve işarete kadar soğuk saf suyla tamamlanır.
 
Çözelti süzgeç kağıdından süzülerek ilk 50 mL atılır. 100 mL süzüntü 200 mL'lik ölçülü balona alınır ve 10 mL sodyum karbonat çözeltisi, 5 mL FeCl3.6H20 çözeltisi eklenip, saf su ile 200 mL'ye tamamlanır ve çalkalanır. Süzgeç kağıdından süzülür, ilk 50 mL atılır. Bu süzüntünün her bir mL'si 10 mg örneğe karşı gelir. Süzüntüden 5 mL, 100 ml'lik balonjojeye konup, 8 -10 mL eksik kalana kadar saf su koyulur.
 
Diğer yandan 100 mL'lik balonjojelere çözelti 3’den 5, 10, 15, 20, 25, 30 mL konur ve 8-10 ml eksik kalana kadar saf su ile doldurulur.
 
Kör için de 100 mL’lik balona 90 mL saf su koyunlur.
 
Tüm balonjojelere l mL HCl, 2 mL sülfanilamid çözeltisi ve l mL coupler reaktifinden eklenir ve hacim çizgilerine kadar saf su ile tamamlanır 10 dakika beklenip 540 nm'de spektrofotometrede absorbansları okunur. Konsantrasyonlara karşı absorbanslar grafiğe geçirilerek, elde edilen bu kalibrasyon eğrisinden örneğe ait absorbans değerinin hangi konsantrasyon değerine karşı geldiği bulunur.

  
Hesaplamalar
 
Nitrit (mg/kg) = (C x V x 40) / m
 
C = Standart eğrisine göre bulununan örneğin konsantrasyonu
V = Örneğin seyreltilme yapılmadan önceki hacmi mL
M = Numune miktarı g