Yemlerde Üreaz Aktivitesi (Kantitatif Metot) Analizi Nasıl Yapılır?

Üreaz Aktivitesi (Kantitatif Metot)

Yöntemin Prensibi

Yöntem, 1 kg soya küspesinin 30°C' da ve 1 dakikada üre çözeltisinden amonyak formunda serbest hale getirdiği miligram nitrojen miktarının bulunması prensibine dayanır. Üreaz aktivitesinin tespiti sonucunda, çiğ soya ve soya küspesinde bulunan tripsin fermentini köstekleyici madde, pişirilmiş veya kavrulmuş soya ürünlerinde ne derecede tahrip edilmiştir gibi sorulara cevap bulunur.

 
Kullanılan Malzemeler ve Cihazlar

• Terazi
• Falkon tüpü (50 mL)
• Beher (100 L)
• Su Banyosu
• Isıtıcılı Manyetik Karıştırıcı
• Balık 
• pH metre
• Büret (50 mL)
• Pipet (5,10 mL)
• Elek
• Kahve değirmeni

Kullanılan Kimyasallar

1. 0,1 N Hidroklorik asit (HCl) asit çözeltisi
2. 0,1 N Sodyum hidroksit (NaOH) çözeltisi
3. 0.05 N fosfat tamponu: 8.95 g Na2HPO4.12H2O ve 6.80 g KH2PO4 bir miktar saf su ile çözdürülüp son hacim 1 L' ye tamamlanır.
4. %0.1'lik metil oranj indikatörü
5. Tamponlu üre çözeltisi: 30 g üre,  1 L 0.05 N fosfat tamponu içerisinde çözdürülür.

 
Deneyin Yapılışı
 
Öncelikle 100 g yem numunesi 1 mm' lik elekten geçecek şekilde öğütülür. Daha sonra öğütülen numuneden 10 g alınarak tekrar 0.2 mm' ye kadar öğütülür (kahve değirmeni ile). Çapı 18 mm, boyu 200 mm olan ağzı rodajlı deney tüpüne 0.2 mm' ye öğütülmüş numuneden 0.05 g (m1) hassasiyetle tartılır. Üzerine 10 mL tamponlu üre çözeltisinden koyulur. Tüpün ağzı kapatılarak kuvvetlice çalkalanıp hemen daha önce sıcaklığı tam olarak 30°C getirilmiş su banyosuna yerleştirilir. 30 dakika beklenir ve bu süre sonunda hemen üzerine 10 mL 0.1 N HCl asit çözeltisi eklenir.  

Çözelti hızlı bir şeklide soğuk su altında oda sıcaklığına kadar soğutulur. Soğuyan çözelti 100 mL'lik behere aktarılır. Deney tüpü 5 mL saf su ile 2 kere yıkanarak behere aktarılır. Beherin içerisine balık atılarak manyetik karıştırıcının üzerine koyulur. Çözeltiye 2-3 damla metil oranj indikatörü eklenir. pH metre elektrodu çözeltinin içerisine daldırılır ve pH 4.7 olana kadar 0.1 N NaOH çözeltisi ile titre edilir. Harcanan NaOH çözeltisi hacmi kaydedilir (V1)

Şahit deneme için cam tüpe 10 mL  tamponlu üre çözeltisi ve 10 mL 0.1 N HCl asit çözeltisi eklenir. Üzerine tam olarak tartılmış  0.05 g ince öğütülmüş soya küspesi ilave edilir. Tüp bu sefer yarım saat buzlu suda bekletilir. Bu sürenin sonunda  çözelti 100 mL'lik behere aktarılır. Deney tüpü 5 mL saf su ile 2 kere yıkanarak behere aktarılır. Beherin içerisine balık atılarak manyetik karıştırıcının üzerine koyulur. Çözeltiye 2-3 damla metil oranj indikatörü eklenir. pH metre elektrodu çözeltinin içerisine daldırılır ve pH 4.7 olana kadar 0.1 N NaOH çözeltisi ile titre edilir. Harcanan NaOH çözeltisi hacmi kaydedilir (V2).

 
Hesaplamalar
 
1 mL 0.1 N NaOH 1.4 mg N'a eşdeğerdir.
 
 

Eğer hazırlanan NaOH çözeltisinin derişimi tam olarak 0.1 N değil de örneğin 0.098 N ise Azot  eşdeğeri şu şekilde hesaplanmalıdır.
 
0.1 N NaOH                   1.4    mg N'a eşdeğerdir.

0.098 N NaOH                x      mg  N
 
 
(0.098 x 1.4) / 0.1 = 1.372   mg Azot' a eşdeğerdir.
 
Üreaz Aktivitesi  (mg N /g / dakika 30° C'da) = 1.4 (V2 - V1) / (m x 30)
 
V1 = Örnek için harcanan ayarlı NaOH çözeltisinin hacmi mL

V2 = Şahit deneme için  harcanan ayarlı NaOH çözeltisinin hacmi mL

m = Alınan örnek miktarı g

Deney yarım saatte gerçekleştiği için, sonuçta dakika olarak verileceğinden 30'a bölünür.